ATP生物發(fā)光檢測(cè)試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)，咨詢！
目錄編號(hào) | 包裝單位 |
規(guī)格1 | 100rxn |
規(guī)格2 | 500rxn |
組成 | 保存 | LF101-01 | LF101-02 |
Luciferase/Luciferin substrate 50× | -20℃ | 0.2ml | 1ml |
L/L Dilution Buffer | -20℃ | 10ml | 50ml |
Lysis Buffer 5× | 4℃ | 10ml | 50ml |
ATP Standard (1mM) | -20℃ | 0.1ml | 0.1ml |
儲(chǔ)存：未打開包裝前避光儲(chǔ)存于-20℃，打開包裝后根據(jù)產(chǎn)品說(shuō)明書上的單個(gè)組分的儲(chǔ)存條件保存。避免反復(fù)凍融以及ATP污染。
利用螢火蟲熒光素酶催化底物熒光素的轉(zhuǎn)化，利用ATP的能量發(fā)射出光子。發(fā)光信號(hào)與存在的ATP量呈正比的原理進(jìn)行ATP的生物發(fā)光檢測(cè)。該產(chǎn)品可用于快速、定量測(cè)定液體樣品中或細(xì)胞或組織內(nèi)的ATP(adenosine 5'-triphosphate)水平。產(chǎn)品中的Lysis Buffer能夠有效裂解細(xì)菌、細(xì)胞以及微生物樣品，充分釋放ATP，適用于多種樣本來(lái)源的ATP檢測(cè)。Luciferase/Luciferin substrate采用優(yōu)化的酶反應(yīng)體系，產(chǎn)生的熒光在一分鐘內(nèi)保持穩(wěn)定。該產(chǎn)品檢測(cè)靈敏度達(dá)到10-16 mol，檢測(cè)范圍在10-11至10-16 mol之間，可用于微量ATP檢測(cè)。
可用于檢測(cè)多種來(lái)源樣品中細(xì)菌、細(xì)胞以及微生物的ATP，及微量ATP檢測(cè)。
1. 方便：反應(yīng)試劑容易配制。
2. 檢測(cè)試劑產(chǎn)生的熒光穩(wěn)定性高，不需要快速混勻操作。
3. 快速：樣品裂解在5-10分鐘內(nèi)完成，加入稀釋后的Luciferase/Luciferin substratet即可檢測(cè)。
4. 靈敏：可檢測(cè)少至10-16 mol ATP。
（1）稀釋Lysis Buffer：將Lysis Buffer室溫溶化，用無(wú)菌水5倍稀釋使用。（為避免ATP污染，請(qǐng)使用無(wú)菌水稀釋）。置于4℃保存。
（2）配制Luciferase/Luciferin Reagent：L/L Dilution Buffer室溫溶化后，作為稀釋液將Luciferase/Luciferin substrate進(jìn)行50倍稀釋，配制成Luciferase/Luciferin Reagent，分裝后-20℃保存。測(cè)定前取出平衡至室溫使用，凍融次數(shù)不超過(guò)3次。
（3）ATP標(biāo)準(zhǔn)品的配制：用Lysis Buffer將ATP母液稀釋至10-12至10-17mol/ul的濃度，分別取10ul進(jìn)行檢測(cè)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，即在10-11至10-16mol ATP范圍內(nèi)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，呈很好的線性關(guān)系。配制方法參考下表：
管號(hào) | 用量體積 | 稀釋液（Lysis Buffer）體積 | 濃度（mol/ul） |
1 | 取10ul母液 | 90ul | 10-10 |
2 | 取10ul管1液體 | 90ul | 10-11 |
3 | 取10ul管2液體 | 90ul | 10-12 |
4 | 取10ul管3液體 | 90ul | 10-13 |
5 | 取10ul管4液體 | 90ul | 10-14 |
6 | 取10ul管5液體 | 90ul | 10-15 |
7 | 取10ul管6液體 | 90ul | 10-16 |
8 | 取10ul管7液體 | 90ul | 10-17 |
2. 樣品裂解：
貼壁細(xì)胞的裂解：
吸除培養(yǎng)液，加入足夠覆蓋細(xì)胞的Lysis Buffer（如24孔細(xì)胞培養(yǎng)板加入150ul Lysis Buffer），可以使用移液器進(jìn)行反復(fù)吹打或晃動(dòng)培養(yǎng)板使Lysis Buffer充分接觸并裂解細(xì)胞，室溫靜置5-10min后，吸取上清進(jìn)行檢測(cè)。
懸浮細(xì)菌、細(xì)胞的裂解：
轉(zhuǎn)移懸浮液到1.5ml離心管中，離心沉淀細(xì)胞，棄盡上清，按照24孔板每孔的細(xì)胞量對(duì)應(yīng)150μl Lysis Buffer的比例加入Lysis Buffer，移液器反復(fù)吹打幾次，室溫靜置5-10分鐘后，吸取上清進(jìn)行檢測(cè)。
對(duì)于懸浮樣品的裂解也可以將樣品充分混勻后直接吸取適量體積加入Lysis Buffer，移液器反復(fù)吹打幾次，室溫靜置5-10分鐘后進(jìn)行檢測(cè)。樣品體積不超過(guò)Lysis Buffer的1/3。
對(duì)植物、動(dòng)物組織樣品的裂解：
取適量組織樣品，加入適當(dāng)比例的Lysis Buffer（如20mg植物組織加入500ul Lysis Buffer）后用玻璃勻漿器或研缽進(jìn)行勻漿。充分勻漿可以確保組織被*裂解，離心后取上清進(jìn)行檢測(cè)。
其它來(lái)源的ATP：
對(duì)于其它有效方法如三氯乙酸法等提取的ATP樣品，或游離ATP的檢測(cè)，可直接稀釋到檢測(cè)范圍后用配制好的Luciferase/Luciferin Reagent進(jìn)行檢測(cè)。
3. 樣品測(cè)定：
（1）ATP標(biāo)準(zhǔn)品的測(cè)定：吸取50ul配制好的Luciferase/Luciferin Reagent加入測(cè)定管中，放置2分鐘以減少背景發(fā)光值，加入10ul 配制好的ATP標(biāo)準(zhǔn)品，移液器輕輕吹打幾次，立即進(jìn)行檢測(cè)。制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的同時(shí)設(shè)置陰性對(duì)照，即不添加ATP，直接將10ul Lysis Buffer加入50ul Luciferase/Luciferin Reagent中進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)定試劑的背景發(fā)光值。如果背景發(fā)光值過(guò)高，可以將配制好的Luciferase/Luciferin Reagent放入測(cè)定管后室溫放置15分鐘以消耗ATP，降低背景發(fā)光值。
（2）樣品的測(cè)定：吸取50ul Luciferase/Luciferin Reagent加入測(cè)定管中，加入10ul 樣品裂解混合液，移液器輕輕吹打幾次，立即進(jìn)行檢測(cè)。
（3）制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中ATP的濃度。
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