信帆生物教您革蘭氏染色的小技巧
何為革蘭氏染色
革蘭氏染色是細(xì)菌鑒別染色方法中常使用的，染色結(jié)果可區(qū)分革蘭氏陽(yáng)性菌及陰性菌，是鑒定細(xì)菌重要的分類依據(jù)之一。染色有4種試劑：
初染劑：結(jié)晶紫，步驟中先使用的試劑，把細(xì)菌染成藍(lán)紫色。
媒染劑：革蘭氏碘液，可與初染劑結(jié)合，形成結(jié)晶紫及碘復(fù)合物(CV-I)，加強(qiáng)染料顏色的固定。
脫色劑：95%乙醇，因陽(yáng)性菌與陰性菌細(xì)胞壁構(gòu)造不同，而有不同的脫色反應(yīng)。
復(fù)染劑：番紅，被上述步驟脫色的細(xì)菌，就會(huì)被這此試劑染成紅色。
革蘭氏染色原理：革蘭氏染色法是由丹麥微生物學(xué)家漢斯-克理斯蒂安-革蘭(Hans Christian Gram)于1884年發(fā)明，至今仍為鑒別細(xì)菌之重要方法。依據(jù)革蘭氏染色法可將細(xì)菌分為革蘭氏陽(yáng)性以及革蘭氏陰性兩類。其染色原理推測(cè)與此兩類細(xì)菌之細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)有重大關(guān)系。說(shuō)法有二其一為：革蘭氏陰性細(xì)菌的細(xì)胞壁含脂量高，酒精脫色時(shí)會(huì)將部份脂質(zhì)萃取出來(lái)，而使細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)松動(dòng)，通透性增加，故結(jié)晶紫-碘復(fù)合體(CV-I)被帶出細(xì)菌體外而無(wú)色。
革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌的細(xì)胞壁幾乎不含脂質(zhì)，酒精甚至?xí)辜?xì)胞壁脫水，故結(jié)構(gòu)更加致密，結(jié)晶紫-碘復(fù)合體就被留在細(xì)菌體內(nèi)。其二為：酒精處理時(shí)，會(huì)使細(xì)菌的細(xì)胞壁肽聚醣(peptidoglycan)空隙縮小。革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌之細(xì)胞壁肽聚醣較厚，而革蘭氏陰性細(xì)菌較薄，所以造成結(jié)晶紫-碘復(fù)合體離開(kāi)革蘭氏陰性細(xì)菌的機(jī)會(huì)較大。故以酒精脫色后，取用紅色的番紅進(jìn)行復(fù)染，此時(shí)無(wú)色的革蘭氏陰性細(xì)菌就會(huì)變成粉紅色，而原本已染上藍(lán)色的革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌就會(huì)變成紫色。革蘭氏
染色注意事項(xiàng)：不論何種染色法，基本都要先熟習(xí)抹片的制作，抹片應(yīng)厚薄適中，且宜勻而薄，細(xì)菌量不宜太多。染色時(shí)，脫色步驟可影響結(jié)果正確與否，脫色過(guò)度會(huì)使初染劑流失，使革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌變?yōu)楦锾m氏陰性細(xì)菌的顏色：但脫色不足，則無(wú)法*去除CV-I復(fù)合物，結(jié)果使革蘭氏陰性細(xì)菌呈現(xiàn)革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌的顏色。
此步驟非常需要經(jīng)驗(yàn)的累積。每種染劑之間，以蒸餾水或無(wú)菌水充分清洗，以除去剩余的染液。宜使用18-24小時(shí)培養(yǎng)的新鮮菌落，因老化的細(xì)菌易失去保留初染劑的能力，而顯示出錯(cuò)誤的結(jié)果，可能部分染成紅色，部分呈紫色。建議每次染色時(shí)，可以帶品管玻片一起染色，確定染色時(shí)間及步驟正確。
相關(guān)產(chǎn)品如下：
瑞氏染色液(Wright stain)
瑞氏-姬姆薩復(fù)合染色液
吉姆薩染色液(Giemsa stain,染色體)
Gram-Twort革蘭染色液
標(biāo)準(zhǔn)革蘭氏染色液
增強(qiáng)革蘭氏染色液
改良Gram-Weigert革蘭染色液(苯胺結(jié)晶紫法)
conn改良Weigert革蘭染色液
Gram碘液
標(biāo)準(zhǔn)魯哥氏染色液(Lugol's碘液,1%)
魯哥氏染色液(Lugol's碘液,5%,無(wú)菌)
魯哥氏染色液(Lugol's碘液,5%)
D'Autoni碘液(1%)
芽孢染色液(Scharffer-Fulton法)
莢膜染色液(Hiss法)
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