細(xì)胞活力(活死細(xì)胞染色)檢測試劑盒適用于哪些實(shí)驗(yàn)
細(xì)胞活力(活死細(xì)胞染色)檢測試劑盒(Calcein AM,PI法，適用于FACS、FM) 通過同時(shí)檢測細(xì)胞內(nèi)酯酶活性和質(zhì)膜完整性，提供一種判斷細(xì)胞活力的熒光染色方法。
本試劑盒內(nèi)含有兩種染料：鈣黃綠素-AM (Calcein-AM) 和碘化丙啶 (PI)，Calcein-AM可透過活細(xì)胞膜，通過活細(xì)胞內(nèi)的酯酶作用由幾乎無熒光的Calcein-AM脫去AM基團(tuán)生成具有強(qiáng)烈熒光信號(hào)的綠色熒光物質(zhì)Calcein（Ex/Em：495nm/515nm），因此活細(xì)胞可被檢測到綠色熒光。另一方面PI不能透過活細(xì)胞的細(xì)胞膜，但當(dāng)細(xì)胞膜受損時(shí)PI可進(jìn)入到死細(xì)胞內(nèi)并與核酸結(jié)合，產(chǎn)生明亮的紅色熒光（Ex/Em：535nm/617nm），因此死細(xì)胞會(huì)被檢測到紅色熒光。用490nm激發(fā)時(shí)可用熒光顯微鏡同時(shí)觀察活細(xì)胞和死細(xì)胞；而用545nm激發(fā)時(shí)僅可觀察到死細(xì)胞。
本試劑盒適用于熒光顯微鏡、流式細(xì)胞儀、熒光酶標(biāo)儀等熒光檢測系統(tǒng)。本試劑盒可以應(yīng)用于大多數(shù)的真核哺乳動(dòng)物細(xì)胞，但不適用于細(xì)菌和真菌。
產(chǎn)品應(yīng)用實(shí)測：
細(xì)胞：Hela；
凋亡處理：Apoptosis Activator 2
檢測工作濃度：2 µM calcein AM, 8 µM PI；
孵育時(shí)間：40 min；
檢測條件：熒光顯微鏡，200×。
結(jié)果：活細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)成綠色熒光，死細(xì)胞細(xì)胞核呈紅色熒光，顏色鮮明。
注意事項(xiàng)：
1. 本試劑盒中的Calcein-AM Solution和PI Solution量很少，有可能會(huì)粘在蓋子或管壁上，開封前請先適當(dāng)離心至管底。
2. 由于Calcein-AM儲(chǔ)存液對濕度非常敏感，請?jiān)诿看问褂煤缶o緊密封Calcein-AM儲(chǔ)存液的蓋子。如果不能一次用完，建議根據(jù)單次用量分裝密封保存。例如分裝成10μl/管，用封口膜封口，并用鋁箔紙包裹，放在一個(gè)密閉性能好的塑料袋中，并放入一包干燥劑，在-20℃密封避光保存。
3. 染色工作液必須現(xiàn)配現(xiàn)用，配制好的工作液請?jiān)诋?dāng)天使用。
4. 熒光染料均存在淬滅問題，保存和使用本試劑盒的過程中請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測。
5. 碘化丙啶對人體有刺激性，操作時(shí)請小心，并注意適當(dāng)防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。
6. 為了您的安全和健康，操作時(shí)請穿著實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套。
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